Uji Kadar γ-Globulin : Metode Biuret

1.      Uji Kadar γ-Globulin : Metode Biuret

6.1            Tujuan

Untuk menentukkan kadar gamma globulin dalam darah dengan metode Biuret.

6.2            Metode yang Digunakan

Metode Biuret

6.3            Prinsip Pemeriksaan

Reagen biuret bereaksi dengan gamma globulin (protein) melalui ikatan peptide dan membentuk kompleks berwarna violet. Intensitas warna yang dihasilkan sebanding dengan kadar gamma globulin dalam sampel. Intensitas warna diukur dengan metode kalorimetri menggunakan spektrofotometer.

6.4            Alat dan Bahan

a.      Alat

Tabung reaksi

Pipet volume

Sentrifugator

Kertas saring

b.      Bahan

Pereaksi gamma globulin (Bio Analitika^®)

Pereaksi Biuret

Larutan NaCl 0,9%

Standar protein (Bio Analitika^®)

6.5            Cara Kerja

Pengendapan Protein

Dimasukkan 2,4 ml pereaksi gamma globulin ke dalam tabung sentrifugasi

↓

Ditambahkan 0,1 ml serum ke dalam tabung secara hati-hati

↓

Dicampurkan dengan memusingkan tabung secara manual selama 1 menit

                  ↓

Dipusingkan dengan sentrifugasi selama 15 menit dengan kecepatan 3000 rpm

                  ↓

Sentrifugat dituang dengan hati-hati (sisa sentrifugat yang melekat pada dinding tabung dibersihkan)

                  ↓

Presipitat dipakai untuk pemeriksaan

Pemeriksaan dengan Spektrofotometer

Dibuat larutan sesuai dengan tabel berikut

	Tes	Standar	Blanko
Presipitat	+++	-	-
Larutan NaCl 0,9%, ml	1,0	0,9	1,0
Standar protein, ml	-	0,1	-
Biuret, ml	3,0	3,0	3,0

                  ↓

Dicampurkan, ditangguhkan selama 30 menit

                  ↓

Dibaca pada panjang gelombang 540 nm dengan spektrofotometer

6.6            Hasil Pemeriksaan & Interpretasi Hasil

Hasil Pengamatan

Diketahui        :     D_tA     = 0,095

                              D_tB       = 0,094

                              D_st        = 0,062

                              Kadar standar = 2 g%

                              Kadar normal  = 0,7-1,7 g%

Ditanya           :     kadar gamma globulin serum A = ?

                              kadar gamma globulin serum B = ?

Jawab              :     kadar gamma globulin serum A   =

                                                                                   =

                                                                                   = 3,06 g%

                              kadar gamma globulin serum A   =

                                                                                   =

                                                                                   = 3,03 g%

Interpretasi Hasil

Kadar gamma globulin pada serum A dan serum B berada di atas kadar normal gamma globulin. Tingginya kadar gamma globulin dapat menandai adanya infeksi dalam tubuh (antibodi merupakan salah satu contoh gamma globulin). Tingginya kadar gamma globulin juga mengindikasikan adanya masalah di hati, misalnya chronic liver desease, sirosis hati, atau penyakit autoimun seperti lupus.

6.7            Pembahasan

Pemeriksaan gamma globulin pada serum bertujuan untuk mengetahui kadar gamma globulin pada serum. Praktikum ini menggunakan pereaksi gama globulin yang berperan dalam pengendapan protein ketika serum disentrifugasi. Pengendapan ini akan membuat gamma globulin terpisah dari larutan sehingga dapat ditetapkan kadarnya. Presipitat atau endapan gamma globulin yang diperoleh kemudian ditambahkan NaCl 0,9% untuk melarutkan gamma globulin. Kemudian dilakukan penambahan reagen biuret.

Dalam pereaksi biuret terkandung 3 macam reagen yaitu reagen yang pertama adalah CuSO₄ dalam aquadest dimana reagen ini berfungsi sebagai penyedia ion Cu²⁺ yang nantinya akan membentuk kompleks dengan protein. Reagen yang kedua adalah K-Na-Tartrat yang berfungsi untuk mencegah terjadinya reduksi pada Cu²⁺ sehingga tidak mengendap. Reagen yang ketiga adalah NaOH dimana fungsinya adalah membuat suasana basa. Suasana basa akan membantu pembentukan Cu(OH)₂ yang nantinya akan menjadi Cu²⁺ dan 2OH^-.

 Ion Cu²⁺ dalam pereaksi biuret akan bereaksi dengan ikatan protein dalam gamma globulin yang kemudian akan menimbulkan warna ungu. Intensitas warna yang dihasilkan sebanding dengan kadar gamma globulin dalam sampel. Intensitas warna kemudian diukur dengan metode spektrofotometri pada panjang gelombang 540 nm. Sebelum dilakukan pengukuran larutan standard dan larutan tes, dilakukan pengukuran larutan blanko. Hal ini bertujuan untuk mengurangi kesalahan pengukuran akibat pembacaan serapan oleh pelarut dan pereaksi.

Reaksi yang terjadi pada penetapan kadar protein (albumin merupakan salah satu jenis protein) dengan metode Biuret adalah :

CuSO₄.5H₂O + 2NaOH                      Cu(OH)₂+Na₂SO₄+5H₂O

Cu(OH)₂                      Cu²⁺  +  2OH^-

           

Kadar gamma globulin normal dalam serum adalah 0,7 – 1,7 gr %.  Stelah dilakukan pengukuran absorbansi dan perhitungan, didapatkan bahwa kadar gamma globulin padaa serum A dan B, masing-masing sebesar 3,06 gr % dan 3,03 gr %. Tingginya kadar gamma globulin dapat menandai adanya infeksi dalam tubuh (antibodi merupakan salah satu contoh gamma globulin). Tingginya kadar gamma globulin juga mengindikasikan adanya masalah di hati, misalnya chronic liver desease, sirosis hati, atau penyakit autoimun seperti lupus.