Uji Kadar Total Protein Serum : Metode Biuret

  Uji Kadar Total Protein Serum : Metode Biuret

4.1              Tujuan

Untuk mengetahui kadar protein dalam serum/plasma dengan menggunakan metode biuret.

4.2              Metode yang Digunakan

Metode Biuret

4.3              Prinsip Pemeriksaan

Terbentuknya senyawa kompleks berwarna ungu antara protein dalam serum/plasma dengan reagen biuret. Semakin pekat warna ungu yang dihasilkan maka kandungan protein yang terdapat dalam serum/plasma akan semakin tinggi. Kompleks yang terbentuk adalah kompleks koordinasi antara ion Cu²⁺ dengan gugus –CO dan –NH dari rantai peptide protein.

4.4              Alat dan Bahan

a.      Alat

Tabung reaksi

Pipet mikro

Pipet ukur

Spektrofotometri

b.      Bahan

Aquades

Pereaksi Biuret

Standar protein (Bio Analitika^®)

4.5              Cara Kerja

Disiapkan 3 buah tabung reaksi, diberi label blanko, standar, dan tesi

↓

Ditambahkan 0,1 ml serum ke dalam tabung secara hati-hati

↓

Dicampurkan dengan memusingkan tabung secara manual selama 1 menit

                  ↓

Kedalam tabung tes, dimasukkan 2,5 ml pereaksi biuret dan 0,05 ml sampel serum/plasma

                  ↓

Ketiga tabung uji digoyang-goyangkan dan didiamkan selama 30 menit

                  ↓

Baca ketiga larutan tersebut pada spektrofotometer ( λ = 546 nm )

↓

Dibaca absorbansi untuk masing-masing larutan dan dihitung kadar protein dalam serum/plasma

4.6              Hasil Pemeriksaan &  Interpretasi Hasil

Hasil Pengamatan :

Absorbansi larutan standar = D_st = 0,648

Absorbansi larutan tes         = D_t  = 0,160

Warna larutan setelah 30 menit

Standar = ungu

Blanko  = biru

Tes       = biru keunguan

Perhitungan :

Kadar total protein          =

                                         =  protein

                                         = 1,704 gram % protein

Nilai Normal = 6,6 – 8,5 gram % protein.

Intepretasi Hasil

Kadar protein di dalam serum yaitu 1,704 gram % protein. Nilai ini berada dibawah rentang nilai normal yaitu 6,6 – 8,5 gram % protein. Hal ini kemungkinan disebabkan oleh protein dalam serum tidak berhasil difiltrasi oleh glomerolus ginjal atau konsumen protein yang terlalu rendah dari makanan.

4.7              Pembahasan

Pada percobaan kali ini dilakukan penetapan kadar protein dengan metode Biuret dengan menggunakan spektrofotometer. Dimana prinsip dari metode ini adalah pengukuran serapan cahaya kompleks berwarna ungu dari protein yang bereaksi dengan pereaksi biuret dimana, yang membentuk kompleks adalah protein dengan ion Cu²⁺ yang terdapat dalam pereaksi biuret dalam suasana basa. Semakin tinggi intensitas cahaya yang diserap oleh alat maka semakin tinggi pula kandungan protein yang terdapat di dalam serum tersebut

Penetapan kadar protein dalam serum dengan metode Biuret adalah pengukuran serapan cahaya kompleks berwarna ungu dari protein yang bereaksi dengan pereaksi biuret dimana, yang membentuk kompleks adalah protein dengan ion Cu²⁺ yang terdapat dalam pereaksi biuret dalam suasana basa. Semakin tinggi intensitas cahaya yang diserap oleh alat maka semakin tinggi pula kandungan protein yang terdapat di dalam serum tersebut.

Penyerapan cahaya oleh protein disebabkan oleh ikatan peptida residu ritosil, triptofonil, dan fenilalanin. Juga turut dipengaruhi oleh gugus-gugus non-protein yang mempunyai sifat menyerap cahaya. Penyerapan maksimum albumin serum manusia terlihat pada panjang gelombang kira-kira 230 nm (peptida) dan dengan puncak lebar pada 280 nm karena serapan residu-residu asam amino aromatik. Spektrum absorbansi suatu larutan protein berfariasi tergantung pada pH dan sesuai dengan ionisasi residu sama amino.

Pada saat sampel dikocok, jangan sampai menimbulkan buih karena akan mempengaruhi pengukuran absorbansi. Dan setelah ditetesi pereaksi biuret, sampel didiamkan selama 30 menit. 30 menit ini merupakan operating time yaitu waktu yang dibutuhkan agar seluruh reaktan/protein bereaksi seluruhnya dengan reagen. Setelah 30 menit, maka sampel diukur absorbansinya dengan alat spektrofotometer dengan panjang gelombang 546 nm. Panjang gelombang 546 nm merupakan panjang gelombang serapan maksimum untuk warna ungu.

Setelah dilakukan pengukuran terhadap standar dan tes didapatkan absorbansi larutan standar adalah 0,648 dan absorbansi larutan test adalah 0,160. Perhitungan kadar protein dalam serum dilakukan dengan menggunakan rumus :

sehingga didapatkan hasil kadar protein dalam serum adalah 1,704 g% protein. Nilai ini berada dibawah rentang nilai normal yaitu 6,6 – 8,5 gram % protein. Hal ini kemungkinan disebabkan oleh protein dalam serum tidak berhasil difiltrasi oleh glomerolus ginjal atau konsumen protein yang terlalu rendah dari makanan.